OTIMIZAÇÃO DE PROTOCOLO PARA EXTRAÇÃO DE DNA DE TECIDO FOLIAR DE DUAS ESPÉCIES DE INGAZEIRO

Sammendrag

A determinação de um protocolo de extração de DNA genômico de boa qualidade e quantidade é condição chave para a realização de estudos moleculares em plantas. Como o DNA isolado deve estar livre de contaminantes, ajustes de protocolo são necessários, especialmente para espécies em que estudos desse tipo são poucos. Assim, o presente estudo teve por objetivo otimizar um protocolo de extração de DNA para as espécies Inga edulis e I. laurina, visando futuros estudos de diversidade genética utilizando marcadores moleculares. Os testes de extração partiram do protocolo padrão de CTAB. Foram testadas duas concentrações do detergente CTAB (2 e 5%) e três concentrações de β-mercaptoetanol (0, 1 e 2%), além da adição de Proteinase K (20 mg.mL-1) no tampão de extração, cujo procedimento foi aplicado em folhas maduras maceradas em nitrogênio líquido. Os resultados demonstraram que o tampão com a concentração de 5% de CTAB foi mais eficiente no isolamento de amostras de DNA das duas espécies de ingazeiro. Quanto ao β-mercaptoetanol, nenhuma das três concentrações utilizadas no tampão de extração interferiram na quantidade e qualidade do DNA obtido. Assim, o método com CTAB 5% no tampão de extração pode ser utilizado para isolamento de DNA visando estudos de caracterização genética com marcadores moleculares.